細胞端粒酶活性分析

細胞端粒酶活性分析
端粒酶活性分析簡介
       端粒是真核細胞染色體末端的一段特殊序列，由上千個6堿基重復序列(TTAGGG)組成。在體細胞中，隨著細胞的分裂，端粒長度會變短。端粒酶是基本的核蛋白逆轉(zhuǎn)錄酶，在細胞染色體復制過程中，能夠以自身RNA為模板，在染色體3’末端合成重復序列，維持端粒的長度。端粒酶的活性端粒酶在正常人體組織中的活性被抑制，但是在一些“不死細胞”如腫瘤細胞、生殖細胞中則具有很高的活性，補償DNA復制導致的端粒縮短從而維持端粒長度的穩(wěn)定。因此可以假設端粒長度可能起到“有絲分裂鐘”的作用，來可作為測量細胞分裂的次數(shù)的標志，終作為細胞衰老和凋亡的信號。因此，檢測細胞中端粒酶的活性對干細胞、腫瘤生物學的研究具有很重要的意義，已有研究表明，在20多種腫瘤細胞中，80%以上可以檢測到粒酶活性。
      利用端粒酶在體外可以以其自身RNA的模板區(qū)為模板，在適宜的寡核苷酸鏈的末端添加6個堿基的重復序列的原理，1994年Kim建立了基于PCR基礎上的端粒重復序列擴增法（telomeric repeat amplification protocol, TRAP）。TRAP主要原理如下：先合成一個18nt的TS做上游引物，端粒酶結(jié)合TS末端的GTT并合成AGGGTTAG，然后每經(jīng)過一次轉(zhuǎn)位合成一個ggttag的6堿基重復序列，端粒酶滅活后，加入一個24nt的CX做下游引物，經(jīng)過多次變性-退火-延伸，擴增端粒酶延伸產(chǎn)物。然后對PCR產(chǎn)物使用不同的方法進行檢測，從而達到檢測端粒酶活性的目的，目前主要的方法有同位素法、染色法、熒光法、ELISA法。目前大部分的端粒酶檢測試劑盒均是按照這個原理發(fā)展起來的。
 
 
檢測結(jié)果示例
通過TRAP-PCR染色法檢測鑒定樣品中端粒酶活性

檢測原理
       端粒DNA與細胞的壽命密切相關，而合成又依賴于端粒酶。正常人體細胞中不能檢測出端粒酶活性的表達，而腫瘤細胞株及大多數(shù)腫瘤組織中的端粒酶活性卻異常的高表達。TRAP－銀染法端粒酶活性檢測試劑盒是采用端粒重復序列擴增的方法，利用銀染技術檢測端粒酶的活性。陽性結(jié)果在凝膠電泳上顯示相隔6 bp的梯狀條帶，條帶的深淺表示端粒酶活性的大小。

實驗室檢測流程
1．細胞端粒酶或組織標本端粒酶的提取。
2．PCR擴增。
3．聚丙烯酰胺凝膠電泳。
4．銀染。

客戶提供
1、樣品信息：包括來源、種屬等。
2、實驗樣本材料：新鮮細胞樣本不少于5×105 個，新鮮血漿樣本不少于500ul。
 
服務周期
2-3周（具體視樣品數(shù)而定）

項目交付
1、提交實驗報告書，包括實驗材料、試劑、儀器、實驗過程方法、結(jié)果及分析。
2、原始數(shù)據(jù)、圖片，以及文本電子版。
 
服務流程
1、提交項目課題相關需求和資料。
2、與我們的專業(yè)技術團隊討論項目細節(jié)。
3、根據(jù)討論后的意見對實驗方案進行修改。
4、雙方均滿意并達成一致，簽訂技術服務合同。
5、開展實驗，按期完成合同規(guī)定的內(nèi)容。
6、結(jié)題，提供實驗原始結(jié)果和分析結(jié)果、實驗流程、實驗條件等等。
 
我們的優(yōu)勢
1、提供各種實驗材料和儀器，滿足項目課題實驗需要。
2、專業(yè)的操作人員。
3、高規(guī)格實驗室。
4、數(shù)據(jù)結(jié)果交付周期快。
5、完善的服務體系，全程跟進，確保滿意。
 
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