PEI線性轉(zhuǎn)染試劑的使用可有什么要領(lǐng)

　　PEI線性轉(zhuǎn)染試劑是由一種陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑，分子量40000，它能與核酸形成復(fù)合物，并使該復(fù)合物進(jìn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣泛適。該試劑可在含血清與抗生素的*培養(yǎng)基中發(fā)揮作用，即使在有血清存在的情況下，它仍然能高效的將核酸導(dǎo)入細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)操作簡單，對大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞都有較高的轉(zhuǎn)染效率(用于常見細(xì)胞系，如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等)，并且細(xì)胞毒性較低。

　　PEI線性轉(zhuǎn)染試劑的注意事項(xiàng)：

　　1、質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高純度無內(nèi)毒素轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒。通過260nm光吸收測定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。

　　2、細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保細(xì)胞沒有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。

　　3、細(xì)胞培養(yǎng)液要求：PEI線性轉(zhuǎn)染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染，并且轉(zhuǎn)染前不需要換培養(yǎng)基。但是制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑，因?yàn)檠鍟?huì)影響復(fù)合物的形成。確保細(xì)胞培養(yǎng)液沒有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。轉(zhuǎn)染時(shí)培養(yǎng)液中不添加抗生素。

　　4、DNA濃度和PEI轉(zhuǎn)染試劑量的優(yōu)化：DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響，初次使用應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑量以得到大的轉(zhuǎn)染效率。使用者可嘗試每1μgDNA使用1～4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例，通常推薦是1:2~1:5。