【轉(zhuǎn)染小課堂】帶你了解轉(zhuǎn)染的奧妙和神奇！

轉(zhuǎn)染(Transfection):是真核細(xì)胞主動(dòng)或被動(dòng)導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。

原理：將DNA導(dǎo)入細(xì)胞使得它可利用細(xì)胞自身的細(xì)胞機(jī)制表達(dá)和合成蛋白質(zhì)，將RNA導(dǎo)入細(xì)胞則是用來通過終止翻譯來降低某特定蛋白的合成。

轉(zhuǎn)染的RNA在細(xì)胞質(zhì)中發(fā)揮作用，DNA則需被轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核中從而達(dá)到有效的轉(zhuǎn)染。在核內(nèi)，DNA會(huì)被短暫表達(dá)或整合到基因組DNA而將該遺傳改變傳代到下一代細(xì)胞。

轉(zhuǎn)染類型：

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染：外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此，一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動(dòng)子和其他調(diào)控元件的分析，在轉(zhuǎn)染后24-96h內(nèi)分析結(jié)果。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)內(nèi)（依賴于各種不同的構(gòu)建）分析結(jié)果，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測(cè)。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染：外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可以作為一種游離體整合到宿主細(xì)胞中。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合，通常需要通過一些選擇性標(biāo)記，如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復(fù)篩選，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。

轉(zhuǎn)染方式：

正向轉(zhuǎn)染：細(xì)胞培養(yǎng)板中先加入細(xì)胞然后再加入轉(zhuǎn)染復(fù)合物的方法。例如：DEAE-葡聚糖法、磷酸鈣法、脂質(zhì)體介導(dǎo)法、非脂質(zhì)體的脂質(zhì)活化的樹枝狀分子介導(dǎo)法、病毒介導(dǎo)法等。

反向轉(zhuǎn)染：核酸和轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物先加入到孔板中，然后再向小孔中加入細(xì)胞。例如：顯微注射、電穿孔、基因槍等。

化學(xué)方法:使用載體分子中和或使帶負(fù)電荷的核酸帶正電荷，包括DEAE-葡聚糖法、磷酸鈣法、非脂質(zhì)體脂質(zhì)分子介導(dǎo)法、陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、通過其他陽離子聚合物(如聚乙烯，PEI，活化的樹枝狀分子介導(dǎo)法)。

生物方法:依靠病毒包裝將非病毒基因轉(zhuǎn)移到細(xì)胞中的方法(也稱為轉(zhuǎn)導(dǎo))，包括病毒介導(dǎo)法。

物理方法:將核酸直接遞送到細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中，包括顯微注射、電穿孔、基因槍。

轉(zhuǎn)染影響因素：

核酸類型：質(zhì)粒DNA，mRNA，siRNA，miRNA的mimic和inhibitors...

細(xì)胞密度：一般來說，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到60%~80%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染可以取得較高的轉(zhuǎn)染效率，過低或過高都會(huì)影響轉(zhuǎn)染效果。

細(xì)胞類型：如原代細(xì)胞、貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞等。

細(xì)胞系的健康程度和存活力

轉(zhuǎn)染試劑類型:脂質(zhì)體、非脂質(zhì)體的脂質(zhì)和活化的樹枝狀分子。

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二、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑

三、RNAi轉(zhuǎn)染試劑