細(xì)胞凍存有何注意事項(xiàng)？

細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常用技術(shù)。原理是將細(xì)胞放在-196℃液氮中，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)，減少細(xì)胞代謝，理論上儲(chǔ)存時(shí)間幾乎是無(wú)限的。那么細(xì)胞凍存有何注意事項(xiàng)呢？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、DMS0稀釋時(shí)會(huì)釋放大量熱量，不能直接加到細(xì)胞液中，須事先配制，且DMSO必須是細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別的；

二、緩慢冷凍，細(xì)胞逐步脫水，不會(huì)因產(chǎn)生大的冰晶而受到損害；

三、選擇細(xì)胞生長(zhǎng)良好、密度約為80-90%、活力達(dá)90%以上的細(xì)胞凍存；

四、凍存時(shí)細(xì)胞密度少于5X105個(gè)活細(xì)胞/mL時(shí)，很難成功復(fù)蘇；

五、細(xì)胞不可長(zhǎng)期保存在-80°C冰箱中。我們建議在-80°C冰箱中的保存時(shí)間不要超過(guò)48h，放入液氮中保存；

六、凍存細(xì)胞操作時(shí)應(yīng)戴防護(hù)眼鏡和手套，以免液氮凍傷；

七、凍存管的蓋子一定要擰緊，否則復(fù)蘇水浴時(shí)會(huì)滲水，造成支原體污染；

八、定期檢查液氮儲(chǔ)備，保證細(xì)胞全部浸在液面下；

九、凍存細(xì)胞時(shí)在每支凍存管都標(biāo)上細(xì)胞的名稱(chēng)，凍存時(shí)間，并記錄在冊(cè)，避免取錯(cuò)細(xì)胞，找不到凍存管等情況；

十、細(xì)胞在冷凍過(guò)程中在-20C冰箱內(nèi)放置時(shí)間不可超過(guò)1小時(shí)，以防止冰晶過(guò)大而破壞細(xì)胞。

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