磁珠法核酸提取過程中的常見誤區(qū)有哪些？

磁珠法核酸提取是傳統(tǒng)DNA提取方法wu法比擬的，那么在磁珠法核酸提取過程中的常見誤區(qū)有哪些呢？讓我們一起來看看吧！

一、磁珠越多，提取效果越好

磁珠的主要特點(diǎn)是既可以分散于液體中，也可以在外加磁場(chǎng)作用下以固態(tài)方式和液相分li任何試劑體系，磁珠和液體的比例都應(yīng)該是有一定閾值的，超過一定的比例，過多的磁珠將因?yàn)闊o法均勻分散于液體中，而喪失其分散的特性，也使得洗滌過程中無法充分增加核酸磁珠和液體接觸的效率。

而過量的磁珠也會(huì)吸附更多的雜質(zhì)，對(duì)于除雜的效果影響非常大。甚至有些時(shí)候，過多的磁珠會(huì)吸附蛋白酶、溶菌酶等在液體體系中起主要作用的功能成分，導(dǎo)致整個(gè)試劑盒效率低下。有很多時(shí)候，在提取效果不佳的時(shí)候，減少磁珠使用量，反而是提升提取效果的最you途徑。

通常情況下，磁珠法試劑盒給出的參考磁珠用量都是略微過量的，因此需要增加磁珠用量改善吸附效率的情況并不多，但如果確定是磁珠用量不足導(dǎo)致的提取效果不好，是可以在一定范圍內(nèi)通過增加磁珠用量來改善提取效果的。

二、試劑使用的越多，提取效果越好

對(duì)于磁珠法而言，每增加一部分液體體積，就減少了更多的磁珠碰撞幾率，而降低磁珠碰撞幾率，會(huì)導(dǎo)致吸附率的大幅度下降。所以很多時(shí)候，雖然增加裂解液和洗滌液確實(shí)能夠起到增強(qiáng)裂解和增強(qiáng)洗滌的作用，但磁珠法提取的核心是磁珠吸附核酸的效率，無法保證磁珠碰撞效率是不能保證核酸提取效率的，所以單純?cè)黾釉噭┦褂昧扛纳铺崛⌒Ч⒉灰欢╳an全有效。

三、洗滌次數(shù)越多，提取效果越好

提取得到的核酸雜質(zhì)過多時(shí)，使用者會(huì)考慮多進(jìn)行幾次洗滌，以得到更為純凈的核酸。增加洗滌次數(shù)確實(shí)有利于提純核酸，但考慮到每次洗滌都會(huì)損失一定量的核酸，且增加了核酸斷裂水解的可能性，所以一般來說洗滌次數(shù)控制在2~4次為宜。

四、樣本取用的越多，提取效果越好

在樣本不夠新鮮或者核酸含量本身就很少的情況下，往往核酸提取效果不好，很多人就會(huì)采用多取樣本的方式增加核酸提取量。

但簡(jiǎn)單地增加樣本取樣量，有時(shí)會(huì)引入過多的雜質(zhì)，超出裂解液裂解能力，也會(huì)使提取效率降低，所以并不推薦通過簡(jiǎn)單的增加樣本取樣量的方式來達(dá)到增加提取量的目的。

如果確實(shí)是由于樣本量不足而引起的提取量過低，建議在前處理先經(jīng)過富集或者濃縮步驟再開始提取。或者增加裂解的wan全性，使更多的核酸暴露出來也是一種解決方法。

五、某一種磁珠好，就應(yīng)該在所有試驗(yàn)中效果都好

磁珠的種類是多種多樣的，粒徑大小不同，分散性不同，磁響應(yīng)時(shí)間不同，包被基礎(chǔ)基質(zhì)不同，外層修飾官能團(tuán)不同，包被密度不同，官能團(tuán)臂長(zhǎng)不同，會(huì)導(dǎo)致磁珠特性千差萬別。

所以不同磁珠所適應(yīng)的實(shí)驗(yàn)和體系也是不同的。就像同樣是核酸提取的試劑，配方也并不wan全相同，同樣應(yīng)用于核酸提取的磁珠，性質(zhì)也并非wan全一致。

有的磁珠在常量核酸提取中表現(xiàn)出了更高的吸附效率，有的磁珠更適用于微量核酸提取。有的磁珠適合偏酸性系列的試劑體系，有的磁珠適合偏堿性系列的試劑體系。有的磁珠磁響應(yīng)性好但是沉降速度快，更適合磁棒式自動(dòng)提取儀;有的磁珠沉降速度慢但是磁響應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，更適合移液式自動(dòng)提取儀。

很少有一種磁珠能適用于所有實(shí)驗(yàn)的情況，除了固定的試劑盒配合，多數(shù)情況下，磁珠和試劑體系都要做一定時(shí)間的配合調(diào)整。

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