蛋白質(zhì)凝膠電泳的原理是什么？有何注意事項？

你知道蛋白質(zhì)凝膠電泳的原理是什么嗎？有何注意事項？讓我們一起來看看吧！

一、原理

將蛋白質(zhì)樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS)以及硫基乙醇一起加熱，使蛋白質(zhì)變性，多肽鏈內(nèi)部的和肽鏈之間的二硫鍵被還原，肽鏈被打開。打開的肽鏈考疏水作用與SDS結(jié)合而帶負(fù)電荷，電泳時在電場作用下，肽鏈在凝膠中向正極遷移。不同的肽鏈由于在遷移時受到的阻力不同，在遷移過程中逐漸分開，其相對遷移率與分子量的對數(shù)間成線性關(guān)系。

二、注意事項

1. 由于與凝膠聚合有關(guān)的硅橡膠稱、玻璃板表面不光滑潔凈，在電泳時會造成凝膠板與玻璃板或硅橡膠條剝離，產(chǎn)生氣泡或滑膠；剝膠時凝膠板易斷裂，為防止引現(xiàn)象，所用器材均應(yīng)嚴(yán)格地清洗。硅橡膠條的凹槽、樣品槽模板及電泳槽用泡沫海綿蘸取“洗潔凈"仔細(xì)清洗。玻璃板浸泡在重鉻酸鉀洗液3-4h或0.2mol/L KOH的酒精溶液中20min以上，用清水洗凈，再用泡沫海綿蘸取“洗潔凈"反復(fù)刷洗，最后用蒸餾水沖洗，直接陰干或用乙醇沖洗后陰干。

2. 安裝電泳槽和鑲有長、短玻璃板的硅橡膠框時，位置要端正，均勻用力旋緊固定螺絲，以免緩沖液滲漏。樣品槽板梳齒應(yīng)平整光滑。

3. 在不連續(xù)電泳體系中，預(yù)電泳只能在分離膠鄉(xiāng)合后進行。洗凈膠面后才能制備濃縮膠。濃縮膠制備后，不能進行預(yù)電泳，以充分利用濃縮膠的濃縮效應(yīng)。

4. 電泳時，電泳儀與電泳槽間正、負(fù)極不能接錯，以免樣品反方向泳動，電泳時應(yīng)選用合適的電流、電壓，過高或過低無可影響電泳效果。

5. SDS純度：在SDS-PAGE中，需高純度的SDS,市售化學(xué)純SDS需重結(jié)晶一次或兩次方可使用。重結(jié)晶方法如下：稱20g SDS放在圓底燒瓶中，加300ml無水乙醇及約半牛角匙活性碳，在燒瓶上接一冷凝管，在水浴中加熱至乙醇微沸，回流約10min,用熱布氏漏斗趁熱過濾。濾液應(yīng)透明，冷卻至室溫后，移至-20℃冰箱中過夜。次日用預(yù)冷的布氏漏斗抽濾，再用少量-20℃預(yù)冷的無水乙醇洗滌白色沉淀3次，盡量抽干，將白色結(jié)晶置真空干燥器中干燥或置40℃以下的烘箱中烘干。

6. 用SDS處理蛋白質(zhì)樣品時，每次都會在沸水溶中保溫3——5min,以免有亞穩(wěn)聚合物存在。

7. 對樣品的要求：應(yīng)采納低離子強度的樣品。如樣品中離子強度高，則應(yīng)透析或經(jīng)離子交換除鹽。加樣時，應(yīng)保持凹形加樣槽膠面平直。加樣量以10-15μl為宜，如樣品系較稀的液體狀，為保證區(qū)帶清晰，加樣量可增加，同時應(yīng)將樣品溶解液濃度提高二倍或更高。

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