細胞傳代培養(yǎng)的常見問題

　　細胞培養(yǎng)幾乎是所有細胞生物學實驗的基礎(chǔ)。其中，細胞傳代是將部分細胞分離出來，重新接種到新的培養(yǎng)皿中，使細胞重新獲得足夠的營養(yǎng)條件和生長空間的過程。那么你知道細胞傳代培養(yǎng)的常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！

　　1、細胞何時進行傳代

　　通常當細胞生長至w全匯合進行傳代，避免細胞生長過密，對于特殊情況，比如有接觸抑制的細胞，一般在密度70-80%就進行傳代，避免引起細胞分化。

　　2、貼壁細胞胰酶消化如何控制時間

　　貼壁細胞培養(yǎng)一個關(guān)鍵步驟胰酶消化，消化過度會導致細胞碎片增多，細胞成片脫落，嚴重影響細胞活性，并有部分細胞漂浮，隨棄去的胰酶流失，消化不足則細胞難于從瓶壁上吹下，反復吹打造成細胞損傷，活性下降。

　　一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據(jù)細胞種類、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細胞，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要對于新購買的細胞，可以先用低濃度的胰酶去摸索一下消化時間，可每隔1分鐘鏡下觀察細胞是否變圓，記錄最佳消化時間，下一次操作參考之前的記錄來控制時間即可。

　　3、如何看活細胞

　　可通過顯微鏡觀察：活細胞中間透亮，飽滿，有光澤，死細胞較暗。或通過臺盼藍染色來計算細胞活力，活細胞排斥臺盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞。有細胞計數(shù)儀的，可直接用計數(shù)儀計數(shù)。

　　4、細胞傳幾代開始死亡或細胞存活率不佳，增值變慢

　　可能是培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳；血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳；或者消化過度，對細胞有嚴重影響；或者是傳代比例不合適；細胞存在污染等。

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