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          CRISPR-CAS9基因編輯

          發(fā)布時(shí)間:2019/3/5點(diǎn)擊次數(shù):2246

          CRISPR-Cas9 是近年興起的用于靶向基因組特定位置,進(jìn)行DNA修飾的重要工具。研究發(fā)現(xiàn)CRISPR是細(xì)菌為了應(yīng)對(duì)病毒的攻擊而演化而來的獲得性免疫防御機(jī)制。具體來說,在CRISPR和Cas9的作用下,經(jīng)由小RNA分子的引導(dǎo),靶向并沉默入侵者遺傳物質(zhì)核酸的關(guān)鍵部分。在該系統(tǒng)中,crRNA(CRISPR-derived RNA)與tracrRNA(trans-activating RNA)結(jié)合形成的復(fù)合物能特異性識(shí)別靶基因序列,并引導(dǎo)Cas9核酸內(nèi)切酶在靶定位點(diǎn)剪切雙鏈DNA,隨后,細(xì)胞的非同源末端連接修復(fù)機(jī)制(NHEJ)重新連接斷裂處的基因組DNA,并引入插入或缺失突變。另外也可以提供一個(gè)外源雙鏈DNA供體片段(Donor)通過同源重組(HR)整合進(jìn)斷裂處的基因組,從而達(dá)到對(duì)基因組DNA進(jìn)行修飾的目的。
          目前,CRISPR-Cas9系統(tǒng)的基因組編輯功能已被應(yīng)用于多種生物,包括小鼠、大鼠、斑馬魚、秀麗隱桿線蟲,也包含多種細(xì)菌和植物,甚在人體上也有應(yīng)用。


           
          基因編輯與RNA干擾的區(qū)別

          方法

          靶標(biāo)

          質(zhì)粒構(gòu)建

          基因表達(dá)

          基因敲除

          基因定點(diǎn)突變

          基因組改變

          遺傳密碼子改變

          遺傳性

          RNAi

          mRNA

          (轉(zhuǎn)錄水平)

          簡(jiǎn)單

          下調(diào)

          否 

          可借助病毒實(shí)現(xiàn)

          CRISPR-CAS9

          DNA序列(基因組水平)

          簡(jiǎn)單

          敲除

          TALEN

          DNA序列(基因組水平)

          復(fù)雜

          敲除

          基因編輯技術(shù)優(yōu)勢(shì)
          1、操作簡(jiǎn)單,靶向性高。
          2、可實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因特定位點(diǎn)定點(diǎn)敲除。
          3、可同時(shí)對(duì)多個(gè)靶基因進(jìn)行敲除。
          4、可應(yīng)用于任何物種。
          5、CRISPR-Cas9系統(tǒng)是由RNA調(diào)控的對(duì)DNA的修飾,可穩(wěn)定遺傳。
          服務(wù)項(xiàng)目
          普通載體、Cas9/Donor腺病毒顆粒、Cas9慢病毒顆粒
          定制gRNA和HR供體載體
          基因敲除細(xì)胞株
          Gene Knock-Out,Knock-in或Gene標(biāo)記
          客戶需要提供材料
          1、物種、基因名稱或者基因ID;
          2、提供靶細(xì)胞。
          服務(wù)流程
          1、提交項(xiàng)目課題相關(guān)需求和資料。
          2、與我們的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)討論項(xiàng)目細(xì)節(jié)。
          3、根據(jù)討論后的意見對(duì)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行修改。 
          4、雙方均滿意并達(dá)成一致,簽訂技術(shù)服務(wù)合同。
          5、開展實(shí)驗(yàn),按期完成合同規(guī)定的內(nèi)容。
          6、結(jié)題,提供實(shí)驗(yàn)原始結(jié)果和分析結(jié)果、實(shí)驗(yàn)流程、實(shí)驗(yàn)條件等等。
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